Skip to content

Pobranie endocytozy, przetwarzanie i retroendocytoza ludzkiej prozyuliny biosyntetycznej przez fibroblasty szczurów transfekowane genem receptora ludzkiej insuliny.

2 miesiące ago

276 words

Analizowano szlak komórkowy i przetwarzanie insuliny i proinsuliny w celu wyjaśnienia możliwych mechanizmów obserwowanych różnic in vivo w biologicznym okresie półtrwania tych dwóch hormonów. Zastosowano linię komórek fibroblastów szczura transfekowanych normalnym genem receptora ludzkiej insuliny. Dzięki amplifikacji genów komórki wyrażają dużą liczbę receptorów i są idealne do badania ligandu, takiego jak proinsulina, który ma niskie powinowactwo do receptora insuliny. Wiązanie konkurencyjne w 4 ° C wykazało, że stężenie nieznakowanej insuliny i proinsuliny potrzebne do wyparcia 50% insuliny znacznikowej lub proinsuliny wynosiło odpowiednio 0,85-0,95 nM i 140-150 nM. Wiązanie z receptorami powierzchniowymi i internalizacja zachodzą w tempie od czterech do pięciu razy szybszym w komórkach inkubowanych z insuliną w porównaniu z proinsuliną. Chlorochina doprowadziła do zwiększenia radioaktywności komórkowej około 1,4-krotnie w komórkach inkubowanych z insuliną lub proinsuliną, ale hamowała pojawienie się zdegradowanej insuliny o 54% i degradację proinsuliny tylko o 10%. Aby zbadać los zinternalizowanego liganda, komórki inkubowano z insuliną i proinsuliną, aż do wystąpienia wiązania w stanie ustalonym. Ligand związany na powierzchni usunięto przez przemycie kwasem, a pozostałą radioaktywność związaną z komórkami reprezentowała internalizowany ligand. Komórki następnie ponownie inkubowano w buforze o temperaturze 37 ° C i radioaktywność związaną z komórką oraz radioaktywność uwalnianą do pożywki analizowano przez strącanie TCA, Sephadex G-50 i HPLC. Wyniki wykazały, że proinsulina łatwiej ominuje wewnątrzkomórkową maszynerię degradacyjną, a zatem jest uwalniana w stanie nienaruszonym z komórki za pośrednictwem szlaku retroendocytotycznego. Wyniki te mogą pomóc w wyjaśnieniu przedłużonego tempa usuwania metabolizmu i odpowiedzi biologicznej proinsuliny in vivo.
[podobne: balneolog, telfexo cena, dni stargardu 2015 ]

0 thoughts on “Pobranie endocytozy, przetwarzanie i retroendocytoza ludzkiej prozyuliny biosyntetycznej przez fibroblasty szczurów transfekowane genem receptora ludzkiej insuliny.”